黑色素瘤模型由人类恶性黑色素瘤细胞(A375)组成, 正常的, 人源性表皮角质形成细胞(NHEK)和正常人, 人源性皮肤成纤维细胞(NHDF)已被培养成多层的, CM恶性肿瘤不同阶段与黑色素瘤细胞高度分化的表皮. 在文化的不同阶段, 组织呈现径向生长期(RGP), 垂直生长期(VGP), 或者转移性黑色素瘤表型. 细胞使用无血清培养基在细胞培养皿中培养, 并在尖端的体外皮肤技术上达到分化水平. 在结构上, 黑色素瘤模型与体内黑色素瘤的进展密切相关, 从而提供了一个有价值的研究工具, 理解, 并对最严重的皮肤恶性肿瘤之一进行预防和治疗.

黑色素瘤模型表现出体内样形态和生长特征,均匀且高度可复制. 全层皮肤模型的表皮由有组织的基底部组成, 尖尖的, 细粒度的, 还有角质化的表皮层类似于在体内发现的. 真皮室由胶原基质组成,其中含有活的正常人真皮成纤维细胞(NHDF).

使用黑色素瘤组织的协议是明确和直接的. 亿德官网公司的黑色素瘤组织已经与许多靶向和抗黑色素瘤药物一起使用.

图1

图1. 全层黑色素瘤皮肤模型中的人类转移性黑色素瘤细胞(A375. A375细胞在真皮/表皮交界处形成RGP黑色素瘤淋巴结(第11天). 随着培养时间的延长, 黑色素瘤淋巴结采用VGP形态(第18天),随后分离的细胞簇侵入真皮(转移性侵袭)(第29天). 长箭头表示表皮-真皮交界处的黑色素瘤细胞簇. 短箭头示渗入真皮的黑色素瘤细胞簇.

图2

图2. 黑色素瘤FT皮肤模型的超微结构分析.

全层皮肤黑色素瘤模型(MLNM-FT-A375)透射电子显微图(TEM). A. 黑色素瘤细胞(M)和角质形成细胞(KC)相互作用区域. B. 黑色素瘤细胞与皮下基质的相互作用区域(D). N,细胞核,N,核仁. 箭头表示凋亡的黑色素瘤细胞

图3

图3. 含转移性SK-Mel-28细胞的全层皮肤黑色素瘤模型(MLNM-FT). s - 100抗体染色. 最初在真皮/表皮交界处形成黑色素瘤细胞的小巢(第11天). 随后发生VGP肿瘤(第25天),随后观察到转移到真皮层(第29天). 长箭头表示表皮-真皮连接处的一些黑素瘤细胞簇. 短箭头显示单个黑素瘤细胞浸润真皮.

图4

图4. MLNM-FT-A375全层黑色素瘤皮肤模型中N-Cadherin粘附分子的表达. N-Cadherin抗体染色,40X. N-Cadherin表达随培养时间增加而增加.

肿瘤侵袭与抗黑素瘤药物筛选

亿德官网公司的黑色素瘤组织呈放射状生长阶段, 垂直增长阶段, 转移性黑色素瘤表型, 与体内黑色素瘤的发展同步. 该模型为肿瘤学家和癌症研究人员提供了一个有价值的研究工具, 理解, 并对最严重的皮肤恶性肿瘤之一进行预防和治疗. 浏览我们亿德体育黑素瘤的参考资料 亿德官网参考图书馆 来看看医生和研究人员是如何利用我们的黑色素瘤组织的.

 

组织:

工具: 全层黑色素瘤皮肤构建(MLNM-FT-A375试剂盒)由24个组织组成. (组织“套件”包含组织, 少量培养基:少量培养基, and plasticware; contact 亿德官网 for specific kit contents.)

基质: 使用单孔组织培养板插入物.g. 细胞CM单孔组织培养板插入,孔径= 0.4µm,表面积= 0.6 cm2).

文化: 最初浸入水中,然后在气液界面处.

组织学: 上皮:8-12层上皮细胞加角质层(基底, 尖尖的, and 细粒度的 layers); Dermis: Collagen gel containing fibroblasts. 早期黑色素瘤细胞在真皮/表皮交界处形成淋巴结. 后期黑色素瘤发展为RGP(径向生长期), VGP(垂直生长期)和连续侵袭真皮成分.

很多数字: 每周生产的组织批次被分配一个特定的批号. 在批号的末尾加上一个字母,以便在给定的大量组织中区分单个试剂盒. 所有的组织套件在细胞方面都是相同的, medium, 处理, 培养条件, 等.

装运: 组织在4°C的培养基上运输,琼脂糖凝胶在6孔板.

装运: 周一. 如有特殊要求,亦可于星期四装运.

交付: 周二早上通过联邦快递优先服务(美国). 美国以外:周二至周四,具体时间取决于地点.

保质期: 包括运输时间在内,组织可在使用前在4°C保存3天. 但是,除非必要,否则不建议延长储存期. 除了, 如果组织在同一天连续使用,可获得最好的重现性, e.g. 周二下午或随后在4°C(周三上午)存放一晚.

长度的实验: 培养可持续长达4周的黑色素瘤的发展和进展,良好的保留正常表皮形态. Cultures must be fed every other day using 亿德官网 culture stands (MEL-STND; click on this link for photo) along with 5.0毫升MLNM-FT-MM.

替代组织:

MLNM-FT-A375(6天): 早期MLNM-FT-A375组织. 组织没有在气液界面进行培养. 客户接收所需培养基(MLNM-FT-GM)继续培养并生产MLNM-FT-A375. 由于本产品的专利性质,订购前需要与亿德官网技术代表讨论. 设计用于研究黑色素瘤发展的早期阶段实验设计要求使用早期组织.

MLNM-FT-EXP: 与MLMN-FT-A375相同,不同之处是亿德官网用客户提供的黑色素瘤细胞替换了A375细胞.

细胞:

类型: Human melanoma cells (A375); Normal human epidermal keratinocytes (NHEK); Normal human dermal fibroblasts (NHDF).

来自: 马里gnant melanoma cell line (A375); Neonatal-foreskin tissue (NHEK); Neonatal skin (NHDF);

选择: 人恶性黑色素瘤细胞SK-Mel-28.

筛选: HIV,乙型肝炎,丙型肝炎,支原体.

介质:

基础培养基: MCDB 153基础培养基.

生长因子/激素:表皮生长因子, 胰岛素, 氢化可的松和其他表皮分化的专有刺激物.

血清: 没有一个.

抗生素: 庆大霉素5µg/ml(庆大霉素正常水平的10%).

抗真菌剂: 两性霉素B 0.25µg / ml.

酸碱指示剂: 酚红(0.0012 g/l).

其他添加剂: 用于增强表皮屏障形成的脂质前体(专利).

分析/维护medium: MLNM-FT-MM被用于检测以及MLNM-FT-A375组织的长期维护.

质量控制和无菌:

目视检查: 所有组织都要进行目视检查,如果发现了物理缺陷, 组织被拒绝装运.

最终用途测试:保留生产批次的组织, 生长7天, 固定的组织学, 和分析.

不育: 在整个生产过程中使用的所有介质都要进行无菌检查. 维持培养基加抗生素和不加抗生素孵育1周,检查是否无菌. 从24孔板用于运输的琼脂糖凝胶也培养1周,并检查任何污染的迹象.

筛查病原体: 对所有细胞进行筛选,并使用PCR检测出艾滋病毒、乙型肝炎和丙型肝炎阴性. 然而,没有任何已知的测试方法可以完全保证这些细胞是无病原体的. 因此, 这些产品和所有人类衍生产品应按照CDC-NIH手册中建议的BSL-2水平(生物安全2级)或更高水平进行处理, "微生物和生物医学实验室的生物安全,” 1998. 如需进一步协助,请联系您的现场安全主任或亿德官网技术服务.

批约失败通知书: 如果组织批次没有通过我们的质量控制或无菌测试, 顾客会得到通知,并在适当的时候免费更换纸巾. 因为我们的QC和无菌检测是在出货后进行的, 通知将尽快作出(在正常情况下,无菌不合格将在装运后8天内通知).

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